Микроскопия

Исследования невидимых невооружённым [невооруженным] глазом объектов при помощи микроскопа. Различают световую М., основанную на использовании световых лучей, и электронную М., где вместо световых лучей применяют поток электронов (см. Электронный микроскоп). Световая М. Подразделяется на обычную, фазово-контрастную, аyопт-ральную, интерференционную, поляризационную, люминесцентную, ультрафиолетовую (см. Микроскоп ). Непосредственной М. В световом микроскопе предшествует установление освещения (см. Микроскопическая техника ). В биол.исследованиях производят М. Как живых, так и убитых микрообъектов. Исследование живых бактерий, простейших, клеток макроорганизма проводят в проходящем и отражённом [отраженном] свете. В первом случае изучают прозрачные объекты, приготовляя т.

Н. “влажные” препараты или выращивая микроколонии бактерий на тонком слое питательного агара. Примерами “влажного” препарата служат раздавленная капля и висячая капля . Более чёткие [четкие] результаты прижизненного наблюдения получают при выращивании микробов в Ш-образной камере Пешкова или масляной камере Фонбрюна. За микрокультурой можно вести непрерывное наблюдение, используя вместо обычного столика нагревательный или спец. Инвертированные микроскопы (типа МБИ-12 и МБИ-13) с термостатом и кинокамерами. В отражённом [отраженном] свете исследуют непрозрачные объекты. Для повышения контрастности микрообъектов используют косое освещение, аноптральные объективы, темнопольные и фазово-контрастные устройства. Для получения дополнит.

Сведений о толщине, показателях преломления и двойного лучепреломления, содержании сухой массы в клетках, светопропускаемости и др. Физич. Величинах объекта используют интерференционно-поляризационную М. Прижизненное флюорохромирование микроорганизмов сильно разбавленными р-рами красителей акридинового ряда позволяет производить наблюдения за физиологией клеток с помощью люминесцентного микроскопа, заключение бактерий в спец. Камеру с инертным газом — исследовать живые клетки при помощи электронной М. Чаще микрообъекты микроскопируют в неживом состоянии, изготовляя препараты или срезы. При использовании светлопольной М. Препараты в виде тонкого мазка или среза окрашивают р-рами спец. Красителей. Для иммунофлюоресцентного исследования препараты обрабатывают сыворотками, мечеными флюорохромами.

Для электронной М. Биол. Материалы предварительно контрастируют веществами, интенсивно рассеивающими электроны. Для контрастирования в процессе фиксации липидов и белков используют четырёхокись [четырехокись] осмия, для фосфолипидов — перманганат калия, для соединений, содержащих углеводы,— Рутений красный. В момент фиксации и обезвоживания препараты окрашивают также уранилацетатом и фосфорновольфрамовой к-той. Эффективнее контрастировать материал после изготовления ультратонких срезов. Для изучения тон-Ной структуры частиц (но не тонких срезов материала) используют также негативное окрашивание (водным р-ром фосфорновольфрамового натрия или урановой соли муравьиной к-ты), создающее вокруг объекта тёмный [темный] фон.

Для контрастирования объектов их напыляют тяжёлым [тяжелым] металлом или готовят из него реплики (отпечатки). В случае иммунохимич. Исследования на уровне электронной М. Объект предварительно обрабатывают антителами, конъюгированными с ферритином, диазофенилмеркуриацетатом, пероксидазой или йодом. Микроскопия вирусов (вирусоскопия). Морфологию вирусов изучают след. Методами электронной микроскопии. Ультратонких срезов, негативного контрастирования и оттенения металлами. Метод ультратонких срезов позволяет установить строение вируса на срезе, тип его нуклеиновой к-ты, способ проникновения в клетку и выхода из неё [нее], а также место размножения в клетке. Метод негативного контрастирования даёт [дает] высокое разрешение и позволяет изучить форму и размеры вирионов, структурную организацию их оболочек.

Используя антитела, определяют локализацию антигенных детерминант в структуре вируса. Для негативного контрастирования используют очищенные и концентрированные препараты вирусов. Из контрастирующих веществ чаще применяют соли фосфорновольфрамовой и кремнийвольфрамовой к-т. Метод оттенения металлами (золотом, платиной и др.), испарением их в вакууме позволяет установить размеры и форму вирусов, используя длину полученной тени и угол, под к-рым велось оттенение. Существенный недостаток метода оттенения — значительно меньшее разрешение деталей структуры вируса, чем при методе негативного контрастирования. Под термином “вирусоскопия” всё [все] чаще стали понимать совокупность методов, с помощью к-рых выявляют вирусов в биол.

Материале и изучают их морфологию. См. Также Вирусологические исследования . Лит. Ромейс Б., Микроскопическая техника, пер. С нем., М., 1954. Уикли Б. С., Электронная микроскопия для начинающих, пер. С англ., М., 1975. Киселев Н. А., Электронная микроскопия биологических макромолекул, М., 1965..