Цитохимия

изучает распределение и содержание внутри клетки хим. Соед., динамику их превращений в процессах жизнедеятельности (в т. Ч. При патологии). Ц. Возникла в 1-й пол. 19 в. Значительно усовершенствована и широко используется с сер. 20 в. Для диагностич. Целей, в медицине, биохимии и др. Осн. Методы Ц. 1) микрохимия - выделение определенных клеточных структур (напр., митохондрий или рибосом) путем дифференциального центрифугирования и осуществление хим. Анализа их состава. 2) Микроспектрофотометрия - определение в-в с помощью микроскопа-спектрофотометра непосредственно в клетке по характерному спектру поглощения (напр., нуклеиновых к-т по поглощению пуринами и пирими-динами УФ излучения). 3) Микроинтерферометрия - оценка массы клетки по сдвигу фазы поляризованного света.

После экстракции определенного в-ва можно измерить его содержание в клетке. Микроспектральные и интерферометрич. Методы позволяют проводить хим. Анализ живых клеток. 4) Цитофотометрия окрашенных клеток - качеств. И(или) количеств. Определение в-ва в клетке путем фотометрии окрашенного продукта, к-рый образуется при взаимод. Анализируемого в-ва с красителем или др. В-вом. Измерения осуществляют, используя микроскоп, монохроматор, фотоумножитель и регистрирующее устройство. Для количеств. Исследований применяют также анализаторы изображений. Один из точных методов цитофотометрии - р-ция Фельгена [взаимод. Альдегидных групп, возникших в результате кислотного гидролиза ДНК, с фуксинсернистой к-той (реактив Шиффа) с образованием красно-малинового комплекса, к-рый специфически характеризует распределение ДНК и ее кол-во в ядре].

Активные красители (проционы) образуют ковалентные связи с разными реакционноспособными группами белков или углеводов, окрашивая клеточные структуры. В результате разл. Р-ций выявляются ферменты, определяется их локализация и активность. 5) Флуоресцентная микроскопия и цитофлуорометрия. Осуществляют р-цию в-ва с флуоресцирующим маркером (см., напр., Липидные зонды )и затем по интенсивности флуоресценции определяют кол-во этого в-ва. 6) Авторадиография - определение локализации определенного метаболич. Процесса и его интенсивности в клеточных структурах благодаря введению в организм или в среду клеточной культуры метаболитов, меченных радионуклидами, и приготовления цитоавтографа (препарата из клеток и фотоэмульсии, к-рую проявляют после экспозиции).

7) Иммуноцитохимия -выявление расположения определенного антигена внутри клетки путем получения комплексов между антителами, конъюгированными с красителями, и анализируемыми антигенами. В большинстве методов Ц. Может использоваться также электронный микроскоп. Раздел Ц.- гистохимия. Теми же методами, что в Ц., оценивается распределение и содержание в-в в разных участках ткани или в органе (напр., в разл. Частях печени, в сосудах и т. Д.). Благодаря развитию методов Ц. Впервые были сформулированы идеи о ведущей роли нуклеиновых к-т в синтезе белка, в развитии организмов и наследственности (Б. В. Кедровский, Т. Касперсон, 30-е гг. 20 в.). В 40-х гг. Методами Ц. Было доказано постоянство содержания ДНК в хромосомном наборе (К.

И Р. Вендрели) и на этой основе определена общебиол. Значимость полиплоидных клеток (несут неск. Гомологичных наборов хромосом) и выяснена важная роль клеточной полиплоидии (кратное увеличение числа наборов хромосом) в росте и развитии животных и растений. При использовании радиоактивных предшественников синтеза ДНК, гл. Обр. 3 Н-тимидина (К. Леблон, Л. Н. Жинкин, 60-е гг.), определены важные закономерности обновления клеточных популяций и регенерации тканей. При применении 3H-предшественников РНК и белков изучены закономерности перемещений макромолекул внутри клетки. Благодаря значит. Усовершенствованию флуоресцентной микроскопии (Е. М. Брумберг, М. Н. Мейсель, 60-е гг.) определены изменения структуры хроматина, характеризующие его активность.

При изучении кинетики образования клеточных белков цитохим. И биохим. Методами в 60-70-х гг. Открыт ритм синтеза белка. Определены др. Метаболич. Ритмы такой же околочасовой периодичности (концентрации АТФ и др. Соед. С макроэргич. Связями, полиаминов, нек-рых ионов, изменение рН внутри клеток и активности мн. Ферментов). В физиол. Исследованиях найдены такие же ритмы дыхания организмов, частоты сердечных сокращений, активности мозга, поведения животных. В работах 80-х гг. При гибридизации ДНК клеточного ядра с клонированной ДНК определенного гена установлено положение этого гена в хромосоме. Цитохим. Методы используют в медицине, в частности, для диагностики и прогноза лечения злокачеств. Опухолей. Лит. Пирс Э., Гистохимия, пер.

С англ., М., 1962. Бродский В. Я., Трофика клетки, М., 1966. Введение в количественную цитохимию, пер. С англ., М., 1969. Зеленин А. В., Взаимодействие аминопроизводных акридина с клеткой, М., 1971. Роджерс Э., Авторадиография, пер. С англ., М., 1972. Агроскин Л. С., Папаян Г. В., Цитофотомстрн", Л., 1977. Иванов В. Б., Активные красители в биологии, М., 1982. Бродский В. Я.,Нечаева Н. В., Ритм синтеза белка, М., 1988. В. Я. Бродский..