Гистологическая Техника

Комплекс методич. Приёмов [приемов], используемых в гистологии и патол. Анатомии при изготовлении препаратов клеток, тканей и органов для их последующего микроскопирования. Приготовление постоянных гистол. Препаратов в виде тонких срезов состоит из след. Осн. Этапов. Фиксации, промывки, обезвоживания и заливки кусочков, приготовления срезов, окрашивания, обезвоживания и заключения. Фиксация — сохранение структуры и в нек-рой степени химич. Состава клеток и тканей путём [путем] быстрого воздействия на них химич. Или физич. Агентов, предотвращающих развитие посмертных изменений. Для фиксации используют р-ры формальдегида (4%-ные), глютаральдегида (2—6%-ные), фиксирующие смеси, содержащие уксусную к-ту (жидкость Карнуа), пикриновую к-ту (жидкость Буэна).

Один из лучших фиксаторов, используемый в электронномикроскопич. Исследованиях,— р-р четырёхокиси [четырехокиси] осмия. При применении медленно проникающих фиксаторов (четырёхокись [четырехокись] осмия, глютаральдегид) толщина кусочков тканей должна быть не более 2 мм. Наилучшие результаты даёт [дает] относительно длительная фиксация при t 2—4 °С. Обызвествлённые [Обызвествленные] ткани и структуры после фиксации подвергают декальцинации - обработке к-тами (азотной, соляной и др.) или электрич. Током. По окончании фиксации кусочки промывают в воде или спирте. Дальнейшая обработка заключается в придании кусочкам однородной плотной консистенции, что необходимо для получения тонких срезов. Это достигается либо путём [путем] замораживания кусочков, либо путём [путем] пропитывания — заливки их различными застывающими средами.

При изготовлении срезов на замораживающем микротоме (рис. 1) замораживание объектов достигается либо жидкой углекислотой, либо с помощью термоэлектрич. Охлаждающего столика ТОС. В микротоме-криостате МК-25 (рис. 2) имеется камера с низкой темп-рой, в к-рую заключён [заключен] микротом. Из сред для заливки чаще применяют парафин и целлоидин.При заливке в парафин отмытую от фиксатора ткань обезвоживают (через спирты возрастающей крепости), проводят через промежуточный растворитель (ксилол или хлороформ) и пропитывают парафином при t 55—56 °С, затем, быстро охлаждая кусочки, получают парафиновые блоки. При заливке в целлоидин промежуточным растворителем является спирт — эфир (1:1). Для получения срезов с парафиновых и целлоидиновых блоков используют санный микротом (рис.

3). Окрашиванием срезов достигают контрастирования различных структур клеток и тканей, по-разному воспринимающих те или иные красители. Окрашивают срезы после удаления из них парафина (ксилолом), проводки их через спирты понижающейся концентрации и промывания в воде. Способы окрашивания препаратов многообразны. Из основных красителей чаще используют гематоксилин, кармин, сафранин, метиловый зелёный [зеленый], галлоцианин. Из кислых — эозин, эритрозин, кислый фуксин, индигокармин и др. Спец. Красители выделяют определённые [определенные] компоненты клеток и тканей, напр, слизь окрашивается муцикармином, эластич. Элементы — орсеином и др. Для приготовления препаратов нервной ткани применяют суправитальную окраску метиленовым синим и различные методы импрегнации — восстановление нервными структурами металлов, гл.

Обр. Серебра. После окраски хорошо промытые препараты обезвоживают в спиртах восходящей крепости (до 100%), просветляют в смеси карболовой к-ты и ксилола (1:3), выдерживают в 2 порциях ксилола и затем заключают в среду, обеспечивающую сохранность структур объекта, его окраску и прозрачность (рис. 4), применяя для этого канадский или пихтовый бальзам, полистирол и др. В случаях,когда препарат нельзя приводить в контакт с ксилолом, спиртом, используют для заключения водорастворимые среды (глицерин, желатин или их смеси). Для изучения свежего материала (живых или переживающих объектов) изготовляют временные гистол. Препараты, в к-рых объект заключают в физиол. Р-ры. Большие возможности для прижизненного исследования клеток даёт [дает] метод культуры тканей .

См. Также Микроскопическая техника , Микроскопия . Лит. Ромейс Б., Микроскопическая техника, пер. С нем., М., 1954. Роскин Г. И., Левинсон Л. Б., Микроскопическая техника, 3 изд., М., 1957..